کلونینگ و بیان پروتئین سطحی HER2 انسانی در سطح سلولهای یوکاریوتی با استفاده از تکنیکهای ترانسفکشن و ترانسداکشن بهمنظور تولید تومور در موش | ||
دانشور پزشکی | ||
مقاله 1، دوره 24، شماره 5 - شماره پیاپی 126، دی 1395، صفحه 1-10 اصل مقاله (736.52 K) | ||
نویسندگان | ||
یقظان ناجح طاهر1؛ فاطمه رهبریزاده* 2؛ بتول ثقفی3؛ زهیر حسن صراف4 | ||
1کارشناس ارشد، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
2دانشیار، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
3دانشجوی دکتری تخصصی، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
4استاد، گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
چکیده | ||
مقدمه و هدف: سرطان پستان، پنجمین عامل شایع مرگومیر در سراسر دنیا بوده و در بین زنان شایعترین سرطان کشنده است. HER2 یک آنتیژن سطحی است که در حدود 30درصد سرطانهای پستان، بیان افزایشیافته دارد. هدف این مطالعه کلونینگ ژن گیرندۀ HER2 در وکتور بیانی +pCDNA3.1/Hygro و بیان این پروتئین در سلولهای یوکاریوتی LL2 و ایجاد مدل موشی سرطان پستان میباشد. مواد و روشها: با تخلیص RNA، تکثیر ژن HER2 و کلونکردن آن در وکتور +pCDNA3.1/Hygro، سازۀ بیانکنندۀ ژن HER2 ایجاد و ازطریق توالییابی تأیید گشت. در مرحلۀ بعد، این سازه به سلولهای سرطانی موشی LL2 منتقل گردید. برای ایجاد ردۀ سلولی پایدار، سلولهای ترانسفکته بهمدت یک ماه در محیط حاوی آنتیبیوتیک هیگرومایسین قرار داده شدند. سلولهای حاصله، سرعت رشد کمی داشتند و منجر به ایجاد تومور نشدند. در کنار این کار، از سلولهای LL2 ترانسداکتشده با لنتیویروس حاوی HER2 استفاده کردیم که حدود 106 سلول ترانسداکتشده به موشهای C57BL/6 بهروش زیرجلدی تزریق گردید. ده تا دوازده روز بعد از تزریق، تومور قابللمس بود. نتایج: ژن HER2 با موفقیت تکثیر و در وکتور پلاسمیدی +pCDNA3.1/Hygro کلون شد. تزریق سلولهای LL2 ترانسداکت و ترانسفکتشده با سازۀ حاوی HER2 به موش، نشان داد که فقط سلولهای LL2 ترانسداکتشده با وکتور ویروسی pLEX HER2 قادر به بیان پایدار HER2 انسانی هستند. نتیجهگیری: با کلونینگ و بیان HER2 در سلولهای یوکاریوتی LL2 میتوان مدل سرطان پستان HER2+ در موش ایجاد کرد. | ||
کلیدواژهها | ||
کلونینگ؛ HER2؛ ردۀ سلولی موشی LL2؛ تومور پستان؛ مدل موشی؛ ترانسفکشن | ||
مراجع | ||
1. Cancer-Its various types along with causes, symptoms, treatments and stages, in: cancer info guide. 2009.
2. Bookman MA, Darcy KM, Clarke-Pearson D, Boothby RA, Horowitz IR. Evaluation of monoclonal humanized anti-HER2 antibody, trastuzumab, in patients with recurrent or refractory ovarian or primary peritoneal carcinoma with overexpression of HER2: a phase II trial of the Gynecologic Oncology Group. Journal of Clinical Oncology 2003; 21(2): 283-90.
3. Tai W, Mahato R, Cheng K. The role of HER2 in cancer therapy and targeted drug delivery. Journal of Controlled Release 2010; 146(3): 264–75.
4. Olayioye MA. Update on HER-2 as a target for cancer therapy: intracellular signaling pathways of ErbB2/HER-2 and family members”. Breast Cancer Research 2001; 3(6): 385-9.
5. Garcia-Solis P, Yahia EM, Morales-Tlalpan V, Diaz-Munoz M. Screening of antiproliferative effect of aqueous extracts of plant foods consumed in Mexico on the breast cancer cell line MCF-7. International Journal of Food Sciences and Nutrition 2009; 60(6): 39-46.
6. Coussens L, Yang-Feng TL, Liao YC, Chen E, Gray A, McGrath J, Seeburg PH, Libermann TA, Schlessinger J, Francke U, et al. Tyrosine kinase receptor with extensive homology to EGF receptor shares chromosomal location with neu oncogene. Science 1985; 230(4730): 1132-9.
7. Ross JS, Slodkowska EA, Symmans WF, Pusztai L, Ravdin PM, HortobagyiGN. The HER-2 receptor and breast cancer: ten years of targeted anti-HER-2therapy and personalized medicine. Oncologist 2009; 14(4): 320-68.
8. Arteaga CL. ERBB receptors in cancer: signaling from the inside. Breast Cancer Research 2011; 13(2):304.
9. Yarden Y, Sliwkowski MX. Untangling the ErbB signalling network. Nature reviews. Molecular Cell Biology 2001; 2(2):127-37.
10. Heppner GH, Miller FR, Shekhar PM. Nontransgeni c models of breast cancer. Breast Cancer Research 2000; 2(5): 331-4.
11. Jonkers J, Derksen PW. Modeling metastatic breast cancer in mice. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia 2007; 12(2-3): 191-203.
12. Xanthopoulos JM, Romano AE, Majumdar SK. Response of Mouse Breast Cancer Cells to Anastrozole, Tamoxifen, and the Combination. Journal of Biomedicine and Biotechnology 2005; 2005(1): 10-9.
13. Duś D, Budzyński W, Radzikowski C. LL2 cell line derived from transplantable murine Lewis lung carcinoma--maintenance in vitro and growth characteristics. Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis (Warsz) 1985; 33(6):817-23.
14. Hoffman J, Schirner M, Menrad A. A highly sensitive model for quantification of in vivo tumor angiogenesis induced by alginate- encapsulated tumor cell. Cancer Research 1997; 57: 3847- 51.
15. Mcpherson MJ. PCR the basics from background to bench, Springer-Vergle Telos. 2003.
16. .Li R, Zheng H, Luo RC. Cloning and expression of the HER2 gene in MCF-7 cells. Di 1 jun yi da xue xue bao: Academic Journal of the First Medical College of PLA 2005; 25(10):1264-7.
17. O'Connor S, Li E, Majors BS, He L, Placone J, Baycin D, Betenbaugh MJ, Hristova K. Increased Expression of the Integral Membrane Protein ErbB2 in Chinese Hamster Ovary Cells Expressing the Anti-apoptotic Gene Bcl-xL. Protein Expression and Purification 2009; 67(1): 41–7.
18. Aigner A, Juhl H, Malerczyk C, Tkybusch A, Benz CC, Czubayko F. Expression of a truncated 100 kDa HER2 splice variant acts as an endogenous inhibitor of tumour cell proliferation. Oncogene 2001; 20, 2101-11.
19. Xu TF, Zhang WQ, Yu H, Li D. Construction of an eukaryotic plasmid encoding HER2 and screening of a cell line stably expressing clones. Xi bao yu fen zi mian yi xue za zhi: Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 2009; 25(3): 226-8.
20. Dus D, Budzynski W, Radzikowski C. LL2 cell line derived from transplantable murine Lewis lung carcinoma-maintenance in vitro and growth characteristics. Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis (Warsz) 1985; 33(6): 817-23.
21. Ramírez BS, Pestana ES, Hidalgo GG, García TH, Rodríguez RP, Ullrich A, Férnandez LE. Active antimetastatic immunotherapy in Lewis lung carcinoma with self EGFR extracellular domain protein in VSSP adjuvant. International Journal of Cancer 2006; 119(9): 2190-9.
22. Lu Y, Wei YQ, Tian L, Zhao X, Yang L, Hu B, Kan B, Wen YJ, Liu F, Deng HX, Li J,Mao YQ, Lei S, Huang MJ, Peng F, Jiang Y, Zhou H, Zhou LQ, Luo F. Immunogene therapy of tumors with vaccine based on xenogeneic epidermal growth factor receptor. Journal of Immunology 2003: 15; 170(6): 3162-70.
23. Ghaem Maghami M. Tumor inhibitory effects of immunization with nano phage particle displaying super mimotope of EGFR on pVIII in animal model. [Dissertation]. Tarbiat Modares University: 2010. | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 327 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 224 |