روش سریع و مؤثر ترانسفورم‌سازی باکتری اشریشیاکلی | ||
| دانشور پزشکی | ||
| مقاله 19، دوره 16، شماره 2 - شماره پیاپی 81، تیر 1388، صفحه 71-76 اصل مقاله (265.73 K) | ||
| نویسندگان | ||
| محمدرضا نژادمقدم* ؛ رضا هادوی؛ دکتر محمد باباشمسی؛ دکتر محمد نیاکان | ||
| چکیده | ||
| مقدمه و هدف: ترانسفورم‌سازی مولکولی سلول‌های باکتری، نقشی محوری را در روش‌های کلون‌سازی مولکولی ایفا می‌کند. در حال حاضر عمل ترانسفورم‌سازی به روش شیمیایی و یا به روش شوک الکتریکی (الکتروپوریشن) انجام می‌شود. درصد موفقیت این روش‌ها به میزان تجربه و دقت آزمایش‌کننده ارتباط دارد. بنابراین هر اندازه روش ترانسفورم‌سازی مولکولی کارایی و کیفیت بیش‌تری داشته باشد درصد میزان موفقیت آن روش افزایش خواهد یافت، هدف از تحقیق حاضر طراحی یک روش ساده و سریع برای ترانسفورم‌سازی مولکولی سلول‌های E.coli بود تا ضمن عدم نیاز به ابزارهای گران‌قیمت و اختصاصی واجد کارایی لازم نیز باشد. مواد و روش‌ها: در روش ابدایی ما بعد از آماده‌سازی رسوب سلول باکتریایی، آن را با محلول جدیدی به نام ترانسفورم‌کننده سلول‌های مستعد ( Competent Transformation Solution) (CTS ) مخلوط، پس از اضافه کردن 1 میکرولیتر DNA پلاسمیدی و انکوباسیون در دمای 4 درجه سانتی‌گراد به مدت 30-5 دقیقه به آن گلوکز اضافه شده و در دمای 37 درجه سانتی‌گراد انکوبه گردید، سپس عمل کشت سلول‌ها در پلیت انتخابی LB آگار حاوی 100 میلی‌مولار کلسیم کلراید انجام شد تا پس از انکوباسیون 18 ساعته کلنی‌های مربوط به سلول‌های ترانسفورم شده بر روی پلیت رشد یابند. نتایج: در این روش مرحله شوک گرمایی حذف شد ضمن این‌که کارایی آن بیش‌تر از انواع روش‌های معمول محاسبه گردید (107 سلول ترانسفورم شده در هر میکروگرم DNA پلاسمیدی). نتیجه‌گیری: روش حاضر به عنوان یک روش ساده و راحت برای تهیه همزمان سلول‌های مستعد و ترانسفورم‌سازی معرفی می‌گردد. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| ترانسفورم‌سازی؛ سلول‌های مستعد؛ اشریشیاکلی | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 932 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 533 |
||